血浆游离DNA（cfDNA）已被用于监测基因突变和会诊肿瘤。由于甲状旁腺肿瘤的临床特征存在重复，术前辩别甲状旁腺癌（PC）与甲状旁腺腺瘤（PA）存在较浩劫度。本磋议旨在检测术前PC和PA患者血浆样本中的cfDNA突变情况，以瞻望肿瘤组织中的CDC73基因景象，为甲状旁腺肿瘤的辩别会诊提供依据。本磋议纳入18例PC患者和13例PA患者，接纳下一代测序手艺（NGS）检测患者血浆cfDNA，并以匹配的外周血白细胞DNA手脚对照。通过全外显子测序检测CDC73基因突变或肿瘤组织免疫组化法检测副纤维卵白抒发。接纳逻辑追忆分析评估cfDNA突变对瞻望肿瘤组织CDC73基因景象及辩别会诊的价值，将CDC73基因突变或副纤维卵白（parafibromin）抒发缺失界说为CDC73特殊。

1例PC患者因无肿瘤标本未进行CDC73特殊检测。13例PA患者的肿瘤组织均未检测到CDC73特殊，而17例有标本的PC患者中，10例存在CDC73特殊（P=0.001）。在这10例CDC73特殊的PC患者中，8例的血浆cfDNA中检测到CDC73基因突变；在20例肿瘤组织无CDC73特殊的患者中，4例的血浆cfDNA中检测到该基因突变。以血浆cfDNA中的CDC73景象瞻望肿瘤组织的CDC73特殊，受试者使命特征弧线底下积（AUC）为0.80（95%CI：0.622-0.978）；瞻望肿瘤恶性进程，AUC为0.795（95%CI：0.632-0.958）。

本磋议初次尝试通过血浆cfDNA深度测序评估甲状旁腺肿瘤的基因突变景象，该范例或可为术前识别PC提供助力。

磋议配景

原发性甲状旁腺功能亢进症（PHPT）是一种常见的内分泌疾病，由甲状旁腺腺瘤（PA）、甲状旁腺增生或甲状旁腺癌（PC）导致甲状旁腺组织分泌过量甲状旁腺激素（PTH）引起。其中PA约占PHPT病例的85%，PC则是一种荒漠的恶性肿瘤，预后较差，占PHPT病例的1%-5%。尽管PC患者的10年总生计率为49%-91%，但约60%的患者会出现复发和革新。手术依然PHPT的主要颐养模样，为裁汰复发风险，PC患者需接受包括甲状旁腺病变组织和同侧甲状腺叶在内的整块切除术，而良性PA患者仅需行局部切除术，因此术前精确会诊对笃信手术切除规模至关稠密。然则，由于PC与PA的临床特征存在重复，术前辩别两者难度较大。颈部可波及直径大于3cm的肿块、血清PTH水平高于闲居值10倍、血钙水平逾越3.5mmol/L的患者，患PC的可能性更高。但仅凭临床和生化分析进行辩别会诊的恶果并不睬思，PC术前常被误诊为PA。其确诊需术后通过组织学检讨，如包膜骚动、血管浸润、神收受累及肿瘤骚动操纵组织等打算判断。此外，在发展中国度，很多PA患者因会诊延误也可能出现严重的病情阐扬。经皮细针穿刺活检已成为甲状腺癌等多种肿瘤术前会诊的圭臬范例，但由于存在肿瘤翻脸、出血及肿瘤细胞扩散的风险，该范例并不保举用于甲状旁腺肿瘤的会诊，联系可信把柄的磋议也较为缺少。因此，临床上亟需一种可靠的甲状旁腺肿瘤术前辩别会诊范例。

已有多项磋议尝试寻找血清生物符号物（如外泌体microRNA）以辩别甲状旁腺良恶性肿瘤，但这些范例因检测圭臬化难度大，难以在临床推行应用。PC对血清PTH水平的影响较PA更显赫，当今大皆医疗中心接纳二代或三代检测手艺分析PTH水平，且有磋议报说念PC与PA患者的二代、三代PTH检测值比值存在互异，但这些范例的会诊遵守仍不尽如东说念看法，且尚无后续磋议考证其闭幕。

CDC73基因（原HRPT2基因）与甲状旁腺功能亢进-颌骨肿瘤空洞征（HPT-JT空洞征）联系，该空洞征为常染色体显性遗传病。CDC73基因编码的副纤维卵白是团员酶联系因子1复合物的构成部分，在调控基因转录和组卵白修饰中阐发要津作用。CDC73基因的失活突变会导致PC细胞内核的副纤维卵白免疫组化（IHC）染色阴性。约60%的PC存在CDC73基因突变，而PA中该基因突变的发生率极低。CDC73基因失活突变导致的副纤维卵白抒发缺失，被以为是辩别PC与PA的潜在符号物，且副纤维卵白抒发缺失与PC的复发密切联系。因此，CDC73基因是与PC联系的要津基因，磋议者提出若肿瘤组织的副纤维卵白染色阴性，需对CDC73基因进行测序以检测胚系突变。当今，临床大夫和磋议者已阻滞到，下一代测序（NGS）是检测基因突变的中枢手艺。

血浆游离DNA（cfDNA）已被阐发是会诊和颐养肺癌、结直肠肿瘤、胰腺癌等多种恶性肿瘤的潜在生物符号物。cfDNA是东说念主体种种细胞（包括肿瘤细胞和闲居细胞）开释到轮回系统中的DNA物资，经核酸酶降解为约160个核苷酸的短双链DNA片断，存在于血液中，半衰期为5-150分钟。通过拿获、富集并测序血液中轮回的肿瘤细胞开释的DNA分子，可明确东说念主体肿瘤等种种组织的基因突变景象。基于cfDNA在肿瘤会诊中的上风，本磋议初次对甲状旁腺肿瘤开展联系初步探索。

本磋议旨在考证通过血液cfDNA检测甲状旁腺肿瘤的可行性，通过对患者血清样本进行追忆性NGS检测，识别潜在的基因突变，为甲状旁腺肿瘤提供更全面的分子特征分析。术前监测血浆cfDNA中的CDC73突变景象，或可为评估肿瘤组织中的CDC73基因突变情况提供脚迹。本磋议将结合血浆cfDNA的基因突变景象、临床特征及生化分析闭幕，构建瞻望模子，以推断肿瘤组织的突变景象，助力甲状旁腺恶性肿瘤的识别。

磋议闭幕

磋议部队患者的临床特征：

本磋议共纳入31例患者，其中男性4例、女性27例，样本网罗时的平均年级为48.6±12.3岁。PC组与PA组患者在性别、年级、体质地指数（BMI），以及血清PTH、钙、碱性磷酸酶（ALP）、磷、肌酐水平方面，互异均无统计学真义（表1）。随访时候，15例PC患者出现复发或革新。

表1

cfDNA的基因突变与浓度：

PC组患者血浆样本的平均DNA浓度高于PA组，但互异无统计学真义（PC组：1.56±1.92μg/ml，PA组：0.81±0.53μg/ml，P=0.128）。本磋议中cfDNA的平均去重测序深度为1774×（规模：903×-2790×），两组间的总测序读数和cfDNA灵验测序深度比拟，互异均无统计学真义（P=0.064、P=0.850）。每份血浆样本的cfDNA中平均检测到9.5个基因的28.7个基因变异（图1）。关于通盘部队，未发现突变基因变异（P = 0.95）或基因突变数目（P = 0.12）的显赫互异。

图1

甲状旁腺肿瘤组织中的CDC73突变景象：

30例患者有肿瘤组织的CDC73基因突变检测闭幕。磋议者将CDC73基因突变或副纤维卵白抒发缺失界说为CDC73特殊。1例PC患者因无肿瘤标本未检测。17例PC患者中，10例的肿瘤组织检测到CDC73特殊，13例PA患者的肿瘤组织均未检测到该特殊（P=0.001）。这10例CDC73特殊的PC患者均存在副纤维卵白抒发缺失（图2），其中6例存在CDC73基因突变，包括2例种胚系突变、4例体细胞突变。

图2

诓骗cfDNA瞻望甲状旁腺肿瘤组织的CDC73突变景象：

1例PA患者和12例（66.7%）PC患者的血浆cfDNA中检测到CDC73基因突变。10例肿瘤组织存在CDC73特殊的患者中，8例的血浆cfDNA中检测到该基因突变；值得珍爱的是，5例仅存在体细胞CDC73基因突变的患者，其肿瘤组织与血浆cfDNA中的CDC73基因基因型不一致。1例无肿瘤测序标本的PC患者，其血浆cfDNA中检测到CDC73基因突变。20例肿瘤组织无CDC73特殊的患者中，4例的血浆cfDNA中检测到该基因突变。通过对血浆cfDNA中CDC73基因进行深度测序，瞻望甲状旁腺肿瘤组织CDC73特殊的灵巧度和特异度均为80.0%，cfDNA中其他基因的突变与肿瘤组织的CDC73基因突变无联系性。逻辑追忆分析闭幕夸耀，血浆cfDNA的CDC73突变景象可用于瞻望甲状旁腺肿瘤组织的CDC73基因景象，受试者使命特征弧线底下积（AUC）为0.800（95%CI：0.622-0.978）；将患者年级、血清PTH水对等临床打算纳入逻辑追忆模子后，AUC升至0.935（95%CI：0.841-1.000，图3A）。

图3

诓骗cfDNA瞻望甲状旁腺肿瘤的恶性进程：

逻辑追忆分析闭幕夸耀，在40个检测基因中，仅血浆cfDNA的CDC73突变景象与患者肿瘤组织的CDC73基因景象联系。以cfDNA的CDC73突变景象评估甲状旁腺肿瘤的恶性潜能，AUC为0.795（95%CI：0.632-0.958，图3B）；将临床打算纳入瞻望模子后，年级也被阐发可用于辩别甲状旁腺良恶性肿瘤，该模子的AUC为0.889（95%CI：0.764-1.000，图3B）。

讨 论

尽管PC的发病率较低，但由于我国东说念主口基数大，且血清PTH检测手艺已等闲应用，频年来我国PC患者数目增长赶快。临床中亟需一种术前辩别会诊范例，以笃信患者的手术切除规模，为颐养决策提供依据。

笔者团队此前曾对比PA与PC的线粒体DNA互异，因线粒体DNA拷贝数较高，在血浆或血清中被检测到的可能性更大，但未发现两者的线粒体DNA存在可用于术前辩别会诊的特异性突变特征。后续磋议重心转向基因组DNA，在PC中果决出一系列联系基因及基因变异，其中CDC73基因是最具后劲的候选基因。

由于PC或巨大PA患者的血清PTH水平均可能显赫升高，液体活检或可成为监测PC的灵验妙技。据笔者所知，本磋议初次探索诓骗cfDNA景象瞻望甲状旁腺肿瘤组织的基因突变情况，对18例PC患者和13例PA患者血浆cfDNA中的40个基因进行突变景象检测。已有磋议阐发CDC73基因突变与PC发病风险升高联系。

通过深度测序，本磋议在血浆cfDNA中果决出17个基因的一系列突变，其中最稠密的为CDC73基因突变，这一闭幕或可揭示甲状旁腺肿瘤的基因信息，也阐发了CDC73基因的体细胞失活变异是PA中最常见的变异类型。文件追忆夸耀，40%-100%的安闲性PC患者存在体细胞CDC73基因突变，而约40%的CDC73基因突变患者为胚系突变。本磋议也在2例患者中检测到胚系突变，这指示临床大夫需温煦其家属的疾病筛查与处分。在本磋议的小样本部队中，10例肿瘤组织CDC73特殊的患者中，8例的血浆cfDNA中检测到CDC73基因突变，灵巧度达80.0%；血浆cfDNA的突变景象瞻望肿瘤组织CDC73特殊的AUC为0.80，指示cfDNA有望用于辩别伴/不伴CDC73基因突变的甲状旁腺肿瘤。值得珍爱的是，2例存在CDC73基因胚系突变的患者，其血浆cfDNA中均检测到相应突变。多项磋议标明，血浆cfDNA中的某些基因突变与肿瘤组织高度一致，这一上风使cfDNA检测成为评估非小细胞肺癌患者EGFR突变景象、筛选EGFR酪氨酸激酶禁锢剂颐养适用东说念主群的灵验范例。但本磋议中，存在体细胞CDC73基因突变的患者，其血浆cfDNA与肿瘤组织中的CDC73基因型均不一致。在肿瘤负荷较低等情况下，cfDNA检测的灵巧度可能低于肿瘤组织检测，而cfDNA基因突变与肿瘤组织基因突变景象的关联机制当今尚不解确，有待进一步磋议解释。

基于血浆cfDNA会诊肿瘤存在一定难度，原因在于cfDNA浓度低、片断短，且绝大部分cfDNA开始于东说念主体闲居细胞。本磋议中，2例PC患者（PC11、PC16）的血浆cfDNA中未检测到CDC73基因突变，但其肿瘤组织中CDC73基因编码的副纤维卵白染色为阴性；此外，5例仅存在体细胞CDC73基因突变的PC患者，其肿瘤组织与血浆cfDNA中的CDC73基因型不一致。多种生物学要素会影响cfDNA的检测率，举例患者特征、肿瘤大小、感染等要素可影响cfDNA浓度，肿瘤景象、肿瘤与轮回系统的连通性可影响DNA质地。此外，当今的cfDNA检测有打算主要用于检测点突变（SNVs）和小片断插入缺失（≤50nt），关于基因会通、大片断插入缺失、拷贝数变异（CNVs）等其他基因组变异，短读长（<300bp）的NGS手艺难以检测。肿瘤组织与cfDNA的基因型互异，也可动力于轮回肿瘤DNA佩戴的基因组不齐备。本磋议发现，GNAS、MEN1、RNF43、EZH2是甲状旁腺肿瘤中突变率较高的基因。31例患者样本中，扫数患者均存在GNAS和MEN1基因突变。仅1例患者未检测到RNF43基因突变、2例患者未检测到EZH2基因突变。这一闭幕可能与配景突变联系。已有磋议阐发，MEN1基因如实是与PA联系的常见基因，遗传性多发性内分泌腺瘤1型空洞征中即存在该基因突变。笔者策划，扫数患者均存在MEN1基因突变，可能部分源于克隆性造血产生的残留cfDNA片断，而这些片断并非疾病的运转要素。因此，这些基因的突变景象无法灵验用于甲状旁腺良恶性肿瘤的辩别。闲居细胞和良性组织中也可能存在基因变异，其成因包括环境阐明、细胞当然建树经过等，这些变异并非肿瘤的运转突变，其是否为该疾病配景下的功能性运转突变，或仅为无临床真义的偶发发现，仍需进一步磋议明确。有磋议夸耀，97%的胰腺癌存在KRAS基因突变，但即使是革新性胰腺癌患者，其18%的轮回肿瘤细胞仅佩戴野生型KRAS等位基因。另一种可能性是，这些病变并非恶性肿瘤，而短长恶性的组织特殊。本磋议闭幕指示，诓骗cfDNA瞻望肿瘤组织的CDC73基因突变具有可行性，且被以为是PC会诊符号物的CDC73基因，是cfDNA中唯独的要津突变基因。但cfDNA能否径直用于瞻望肿瘤组织的CDC73基因型，仍需扩大样本量进一步考证。

此外，4例患者（3例PC、1例PA）的血浆cfDNA中检测到CDC73基因突变，但通过NGS检测和副纤维卵白染色，其匹配的肿瘤组织中未发现CDC73特殊。解读cfDNA筛查闭幕的一大生物学难点在于，大部分健康东说念主群的血浆cfDNA中也能检测到低水平的肿瘤联系DNA突变，这类假阳性闭幕的成因可能包括体细胞嵌合、克隆性造血和亚克隆突变。肿瘤组织的全外显子测序仅中式部分肿瘤细胞进行检测，可能遗漏未检测部分肿瘤细胞的突变景象；而血浆中的cfDNA是东说念主体扫数细胞开释的DNA搀杂物，其临床真义需从全体角度解读。值得珍爱的是，4例假阳性病例的血浆cfDNA中均反复检测到一种CDC73基因突变：NM_024529:exon7:c.679_680del: p.R227fs，多位磋议者曾在PC、不典型腺瘤或PA组织中检测到该插入缺失突变，且本磋议中1例PC患者的该突变为胚系突变。因此笔者策划，该突变位点可能为热门突变，且不会导致卵白功能鼓胀丧失，在积蓄大限制cfDNA测序数据前，难以笃信该基因型的临床真义。

cfDNA可手脚肿瘤患者的监测符号物，有磋议报说念，胰腺癌患者的cfDNA水平高于健康东说念主群和胰腺囊肿患者。本磋议部队中，PA组与PC组患者的血浆cfDNA浓度无显赫互异，但诓骗甲状旁腺肿瘤患者血浆cfDNA的基因突变构建会诊模子时，CDC73基因可灵验辩别PA与PC（AUC=0.795）。当今，血清PTH和钙水平升高、肿瘤体积增大是判断甲状旁腺肿瘤良恶性的补助打算，将临床数据与cfDNA检测闭幕结合后，模子的AUC升至0.889。因此，无创生物符号物衔尾检测有望成为PC术前会诊的灵验补助妙技。为进一步评估cfDNA在甲状旁腺肿瘤会诊中的作用，需扩大样本量构建cfDNA突变谱，并结合东说念主类全体遗传配景进行数据分析。

本磋议存在一定局限性：第一，由于PC发病率低，尽管本磋议的血清分析部队已属较大限制，但样本量仍有限，可能高估或低估部分血清生物符号物的临床真义；第二，在当场中式PA样本时，男性PA患者的样本均未通过DNA质地箝制，这可能给统计分析带来一定偏倚；第三，部分血清样本采自复发患者，因大皆PC患者在复发后才被确诊，这可能对初次手术前未复发患者的会诊形成误诊风险；第四，本磋议为追忆性磋议，偏倚难以幸免，需开展前瞻性磋议进一步评估这些生物符号物的临床推行应用价值。

本磋议阐发，通过血浆cfDNA深度测序可评估甲状旁腺肿瘤的基因突变景象，血浆cfDNA中的CDC73突变可为PC的术前辩别会诊提供助力。

“甲状腺癌58基因”、“甲状腺癌80基因检测”、“甲状腺128基因检测”和“实体瘤272基因检测（基础版和PLUS版）”情势，包含CDC73基因E29Dfs*8、R126X、W43X、E53X等突变；此外，“实体瘤1299基因检测”和“实体瘤全外显子组检测”情势皆能完满CDC73基因的沿途外显子检测，以及准确检出TMB值，更多地指点患者精确颐养。

参考文件：

Zheng, Q., Cui, M., Wang开云kaiyun体育, O. et al. Primary exploration of cell-free DNA in the plasma of patients with parathyroid neoplasms using next-generation sequencing. Cancer Cell Int 25, 86 (2025). https://doi.org/10.1186/s12935-025-03699-w